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本研究旨在获得腐败梭菌无毒重组α毒素，并评价其免疫保护性。对已知的腐败梭菌α毒素编码基因进行优化设计和人工合成，获得了缺少第212-222位共11个氨基酸编码序列的基因片段（GCSAΔ11）。将该基因克隆至原核表达载体pET-30a（+）中进行表达与纯化。利用Western blot方法检测获得的重组α毒素（rCSAΔ11）与腐败梭菌天然毒素抗血清的反应性，并采用小鼠检测其毒力。随后，以rCSAΔ...
旨在获得产气荚膜梭菌β毒素（CPB）的重组突变体，并评价其毒力及免疫保护性。对已知的产气荚膜梭菌CPB编码基因进行优化设计，同时引入4个氨基酸突变位点，分别是第212位的精氨酸突变为谷氨酸，第268位的亮氨酸突变为甘氨酸，266位的酪氨酸和275位的色氨酸突变为丙氨酸。此外，在该基因5'端添加Th细胞表位（T）和鞭毛蛋白（flagellin）N末端的编码序列，经人工合成获得重组基因片段（GTFNC...
表达产肠毒素性大肠杆菌F41重组干酪乳杆菌免疫小鼠的保护性分析
ETEC F41 干酪乳酸菌 滴鼻免疫 保护率
2009/11/16
【目的】利用干酪乳酸菌作为抗原传递系统来刺激机体产生黏膜免疫反应,从而研制有效的黏膜疫苗预防ETEC F41的感染。【方法】重组菌在MRS培养基中进行表达,经SDS-PAGE、Western blot检测目的蛋白的表达,间接免疫荧光分析及流式细胞术检测外源蛋白展示到菌体表面。将重组菌及空质粒菌株分别滴鼻接种SPF级Balb/c小鼠,采集血液样品测定小鼠产生抗F41的特异性IgG,收集小鼠肺部冲洗液...
口蹄疫病毒VP1 T、B细胞表位与大肠杆菌肠毒素融合蛋白的免疫保护性研究
口蹄疫病毒 大肠杆菌肠毒素 融合蛋白
2009/6/11
作者对O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1双拷贝T细胞表位（aa 21-40）、B细胞表位（aa 141-160）融合蛋白2020-2020VP1及其与肠毒素大肠杆菌肠毒素融合后蛋白2020-B-2020和2020-B-2020-STI进行了免疫分析。动物试验表明，用2020-2020VP1、2020-B-2020和2020-B-2020-STI 3种融合蛋白分别免疫动物，免疫动物血清中均可产生针对F...
目的 观察重组日本血吸虫 2 6kDaGST抗原 (reSjc2 6GST)免疫役用放养水牛 (简称水牛 )后抗体动态及免疫保护性的效果。 方法 试验组 96头水牛 ,用reSjc2 6GST免疫 3次 ,每次间隔 2wk ,3次剂量分别为 0 2、 0 2和 0 1mg。对照组 90头水牛不作免疫 ;观察 2组水牛免疫前及免疫后 2、 5、 9、 12、 15和 2 0个月的抗体水平及血吸虫感染...
作为一种新型免疫增强剂，鸡脾转移因子不仅可以显著提高机体的细胞免疫水平，而且还可改善其体液免疫水平，增强机体的整体抗病能力。区域性临床试验结果也验证了鸡脾转移因子能显著提高试验鸡对鸡传染性支气管炎、传染性喉气管炎、鸡传染性法氏囊病、鸡新城疫等疫苗的免疫应答能力，提高T淋巴细胞转化率，可提高鸡新城疫抗体1～2个滴度，配合疫苗能有效地预防鸡传染性支气管炎、传染性喉气管炎、鸡传染性法氏囊病、鸡新城疫等...
采用RT-PCR技术首次从孤雌生殖长角血蜱四川株克隆到P27/30基因，扩增序列全长670 bp，包含完整的开放阅读框，编码201个氨基酸，预测蛋白相对分子质量为23.38 ku。同源性分析表明孤雌生殖长角血蜱中国株与日本株P27/30基因同源性高达99.85％。经RTPCR检测分析，该基因在孤雌生殖长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱、饥饿成蜱和饱血成蜱这几个阶段均有表达。将该基因亚克隆后连接到pET32...
坏死梭杆菌FN(A)型毒力株保护性抗原筛选及初步鉴定
坏死梭杆菌 保护性抗原 筛选
2008/12/1
通过胰蛋白酶裂解坏死梭杆菌FN(A)型毒力菌株菌体，分别以菌体裂解物上清和沉淀作为抗原免疫家兔制备血清。利用SDS-PAGE/Western-blot技术在菌体中筛选出4种具有免疫原性的组分，通过免疫后的攻毒试验，筛选出1种具有免疫保护性的抗原。抗原分离纯化后，进行N端氨基酸序列测定、免疫试验及生物学特性研究，据试验结果可初步判定该抗原为溶血素类似物或一种新发现的抗原物质。该抗原不仅能使机体产生保...
用疑似患猪流行性腹泻病（PED）的病猪肠病料， 进行RT-PCR 扩增，获得包括猪流行性腹泻病毒（PEDV）主要保护性抗原基因在内的531个核苷酸序列，将其克隆入pMD-18T载体后测序，核苷酸序列同PEDV CV777 株相应序列同源性为99.44％。根据测序结果和表达载体特点，设计一对引物，扩增PEDV主要保护性抗原基因（COE）501bp。将COE与乳酸乳球菌表面表达载体pNZ8149进行连...
表达禽流感病毒核蛋白基因重组禽痘病毒的构建及其免疫保护性研究
禽流感病毒 重组禽痘病毒 核蛋白基因 免疫保护性
2008/10/20
从含有禽流感病毒A/Goose/Guangdong/1/96 (H5N1)核蛋白 (NP)基因的质粒pUCNP中切下NP基因片段 ,将其亚克隆到pSY5 38质粒 ,再将带有痘苗病毒启动子P11的LacZ基因也平端克隆到pSY5 38质粒 ,然后切下同时含有NP及LacZ基因的片段 ,再亚克隆到禽痘病毒载体pSY6 81,从而构建出表达核蛋白基因的重组禽痘病毒转移载体pSY(NP +LacZ)。
捻转血矛线虫DNA疫苗的构建及山羊免疫保护性试验
山羊 捻转血矛线虫 H11 DNA疫苗
2008/9/17
【目的】构建捻转血矛线虫DNA疫苗，并研究该疫苗对山羊的免疫保护效果。【方法】将捻转血矛线虫重要保护性抗原H11的编码基因分H11-1、H11-2和H11-3三部分，分别亚克隆到基因疫苗载体pcDNA4/His Max C中，用酶切反应、序列测定等方法鉴定重组疫苗。将纯化的DNA疫苗肌肉注射山羊后，用RT-PCR、Western blotting和ELISA方法检测疫苗在山羊体内的转录、翻译和诱导...
【目的】获得不同发育阶段基因联合表达的具有良好免疫保护性的重组抗原，为研制高效的猪囊虫基因工程疫苗奠定基础。【方法】PCR扩增截去45W-4B基因的信号肽和C端17个疏水氨基酸序列，经BamH I和EcoR I酶切后与表达载体pGEX－4T-1连接转化BL21感受态细胞，酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆。测序正确的质粒经EcoR I和Not I酶切处理后与截去信号肽的18 kD基因连接，构建双基因融合...
坏死梭杆菌FN(A)型毒力株保护性抗原筛选研究
坏死梭杆菌 保护性抗原 筛选
2008/8/21
通过胰蛋白酶裂解坏死梭杆菌FN(A)型毒力菌株菌体，分别用菌体裂解物上清和沉淀作抗原，免疫家兔制备血清。利用SDS-PAGE/Western-blot技术在菌体中筛选出4种具有免疫原性的组分，通过免疫后的攻毒试验，筛选出1种具有免疫保护性的抗原。抗原分离纯化后，进行N端氨基酸序列测定、免疫试验及生物特性研究，据试验结果可初步判定该抗原为溶血素类似物或一种新发现的抗原物质。该抗原不仅能使机体产生保护...
该研究通过对2个疫苗毒和10流行毒E2基因序列同源性的比较分析，通过对国内已发表的不同时期、不同地区毒株的序列比较，确认甘肃省正在流行的10个猪瘟病毒(1997-1998)属于基因型Ⅱ的二个不同的基因亚型，而C-株疫苗毒和中国20世纪50-60年代流行的石门毒属于基因型I的同一个基因亚型，由此表明，甘肃省猪瘟流行毒株与C-株疫苗毒有较大的差异，属于不同的基因型(同源性82-84％)。通过对E2基因...