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一种用于单球水平的抗肿瘤药物筛选微流控芯片及应用，该方法的步骤为利用热熔后的SU-8模板制作PDMS通道芯片模板；可一步法制作多个尺寸的凹陷小孔，用于形成大小不同的肿瘤微球。微流控芯片为2层芯片，含有12个平行的微流控单元，该芯片可以用于肿瘤细胞的单球水平的抗肿瘤药物筛选，该方法无需昂贵的刻蚀设备，具有操作简单、快速，实验成本低廉，不涉及有机试剂，环境友好，可与其它技术集成化的优点。