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Dot-ELISA法检测致病性嗜水气单胞菌
嗜水气单胞菌 胞外蛋白酶 斑点酶联免疫吸附试验(DotELISA) 检测
2013/12/3
在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上，用斑点酶联免疫吸附试验(DotELISA)检测致病性嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila，Ah）胞外蛋白酶ECPase54，同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16S rRNA基因检测72株气单胞菌分离株。结果显示致病性嗜水气单胞菌检测阳性率分别如下：DotELISA法90.3%（65/72）、脱脂奶平板法75%（54/...
猪链球菌2型（Streptococcus suis type 2，SS2）是一种广泛分布的人畜共患病原菌，严重危害着人类健康和养猪业的发展。本试验旨在研究分泌核酸酶基因（SsnA）作为分子诊断标识在对SS2感染的鉴别诊断中所起的作用。作者以SS2-LT菌株基因组DNA为模板，通过PCR扩增SsnA基因片段，将该片段克隆到表达载体pET-28a(+)中，在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达，获得大...
牛病毒性腹泻病病毒NS3表位串联蛋白表达及抗体间接ELISA方法的建立
BVDV NS3蛋白 表位串联 间接ELISA
2013/12/3
为建立一种有效的牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)抗体检测方法，作者将BVDV NS3蛋白2个抗原表位的编码核酸序列进行串联，构建重组表达载体pET30aEXnN，并在原核表达系统中表达了重组蛋白。选取包含12个表位肽的重组蛋白（rBVDVEX6N）作为包被抗原建立NS3蛋白抗体间接ELISA方法。该方法的特异性和稳定性良好，与2种商品化...
以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒
FMDV ELISA 合成肽
2010/4/8
【目的】建立合成多肽抗原检测FMD NSP 抗体的 ELISA 方法。【方法】固相法合成特异性FMDV NSP B细胞表位肽,将其偶联在BSA载体蛋白上,作为抗原包被在ELISA板上,制备检测抗FMDV NSP抗体的ELISA 试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。【结果】抗原包被浓度选择2.5μg•mL-1; 检测199 份血清标本,与美国UBI商品试剂盒符合率达到96.48%,与国产3...
为建立一种稳定、快速从感染鸡体内检测或分离外源性鸡白血病病毒（ALV）的简易方法，作者使用A亚型（ALVA）、C亚型(ALVC)以及2株J亚型（ALVJPY和ALVJWS）鸡白血病病毒（ALV）按高、中、低（即100、10、1 μL）3种接种量人工接种DF1细胞，在接种后不同时间用A、B、C 3种ELISA试剂盒检测ALV抗原（P27）。结果表明，对ALVA和ALVJPY，高剂量...
鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法的建立
鹿血 ELISA 多克隆抗体
2011/8/16
通过制备兔抗鹿血和小鼠抗鹿血多克隆抗体,建立了以兔抗为包被抗体,鼠抗为检测抗体的鹿血双抗体夹心间接ELISA检测方法。采用方阵滴定法确定了抗原、抗体的最佳反应浓度,并对ELISA各反应条件进行优化。结果表明:兔抗最佳包被浓度为1∶8 000,鼠抗的最佳反应浓度为1∶2 000,最佳封闭时间为60 min。该方法对鹿血检测灵敏,可达3×10-4倍稀释度,且对马血、牛血、羊血、猪血的检测结果均为阴性...
抗体夹心BGT-ELISA方法的建立及在转基因白桦中的应用
转基因白桦 多克隆抗体 酶标抗体 ELISA
2010/2/21
本文以转基因白桦（Betula platyphylla Suk.）中蜘蛛杀虫肽与Bt-toxin C肽融合蛋白（BGT）基因的表达产物为研究目标，采用原核表达及纯化出融合蛋白His-BGT作为抗原进行兔免疫，得到相应的抗血清，采用ELISA法检测效价在1:10 000以上，并对抗血清进行了免疫亲和层析，获得了高纯度的IgG，Western blot检测具有较好的特异性。采用过碘酸钠法将抗体标记辣根...
饲料中三聚氰胺的ELISA检测方法的探讨
三聚氰胺 检测 ELISA方法
2010/5/5
试验利用BRAXIS试剂盒和自制（经气相色谱质谱法确证不含三聚氰胺）三聚氰胺添加量为2 mg/kg的配合料和浓缩料作为阳性对照样品,对100批次饲料产品的进行了三聚氰胺筛选,并将两种方法的筛选结果按照NY/T1372-2007中的气相色谱质谱法进行了确证和比较。试验结果表明：利用三聚氰胺添加量为2 mg/kg配合料和浓缩料为阳性对照样品,对样品的筛选结果,要比使用BRAXIS试剂盒的内制曲线筛选的...
为建立一种稳定、快速从感染鸡体内检测或分离外源性鸡白血病病毒（ALV）的简易方法，作者使用A亚型（ALVA）、C亚型(ALVC)以及2株J亚型（ALVJPY和ALVJWS）鸡白血病病毒（ALV）按高、中、低（即100、10、1 μL）3种接种量人工接种DF1细胞，在接种后不同时间用A、B、C 3种ELISA试剂盒检测ALV抗原（P27）。结果表明，对ALVA和ALVJPY，高剂量...
抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法的建立
猪肺炎支原体 IgA 间接ELISA
2009/11/3
为了更准确地对猪肺炎支原体感染及免疫状况进行检测，作者拟建立抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法。在比较了猪肺炎支原体全菌抗原和粘附因子P97R1原核表达蛋白后，选择后者作为包被抗原；以羊抗猪IgA为二抗，兔抗猪IgGHRP作为酶标三抗，并分别对包被抗原的浓度、样品的孵育时间、二抗与三抗的最佳稀释度和作用时间以及显色液的作用时间作了优化。最终建立了稳定而特异的抗猪肺炎支原体IgA的间接EL...
采用RT PCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区，进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET32a，将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET32aPG 转化BL21(DE3)，经1.0 mmol·L1 IPTG 诱导，外源基因获得高效表达。通过Westernblot以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后的表达产物作为抗原包被酶标板，用已知中和抗体效价的...
以pb101质粒为模板，PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX4T3env后，转化入宿主菌BL21，IPTG诱导表达env蛋白，对表达的蛋白进行SDSPAGE及Western blot分析。结果表明，表达的重组蛋白具有良好的反应原性，相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原, 建立了检测REV抗体的间接ELISA方法...
重组抗原rMIC3-ELISA检测猪弓形虫抗体的研究
刚地弓形虫 rMIC3 ELISA 检测
2010/1/7
［目的］探讨检测猪弓形虫病的新方法。［方法］应用纯化的重组弓形虫微线体蛋白3（rMIC3）作为包被抗原建立间接ELISA 方法，用于猪弓形虫抗体的检测。［结果］该法所用最佳抗原浓度为3.40 μg/ml，最适宜的血清稀释倍数为1〖DK〗∶160，与猪瘟病毒等阳性血清不发生交叉反应，与LAT的符合率为92.56%。［结论］该方法快速、特异、重复性好，可用于猪弓形虫病的诊断和流行病学的调查。
猪水肿毒素单抗竞争ELISA试剂盒的研制及应用
猪水肿毒素 单克隆抗体 单抗竞争ELISA 抗体检测
2009/9/8
本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法。以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗，并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪水肿毒素抗体。经过研究确定抗原包被浓度为032 μg·mL-1，待检血清最佳稀释度为1∶2，酶标单抗工作浓度为1∶3 200，血清抑制率大于40%为阳性。应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同...
应用纯化的Asia1型口蹄疫病毒VP1蛋白作为抗原，采用过碘酸钠法标记纯化的单抗，建立了单抗竞争ELISA，检测10份阳性猪口蹄疫血清及200多份阴性血清，试验结果与样品的背景相一致。敏感性试验和重复试验结果表明，该方法具有稳定和敏感等特性，适合Asia1型猪口蹄疫病毒抗体的监测。