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应用cDNA芯片分析79个新基因的人胚组织表达谱
cDNA芯片 新基因 表达序列标签（EST） 差异表达RNA分析
2008/6/12
大规模cDNA测序和生物信息学技术相结合，得到来自于商品化的人胚肾cDNA文库79个代表新基因的表达序列标签(EST).随后，采用高速度机械手制备这些cDNA的基因芯片，用于鉴定79个新基因的ESTs在20周、26周两个胚胎时期6种组织中的基因表达状况，以研究这些EST片段代表的新基因功能提供线索.通过芯片杂交及结果分析，得到同一个组织两个不同时相8个差异表达的基因，随后的RNA印迹分析的...
鸡下丘脑cDNA文库的构建及部分克隆ESTs序列初步分析
鸡 下丘脑 cDNA文库 表达序列标签
2008/2/5
摘要以鸡下丘脑为实验材料，以λgt10为载体，构建了鸡下丘脑cDNA文库。结果表明，文库的滴度为3.8×106，重组率为80％，插入片段大小集中在1.0～3.0kb之间。从cDNA文库中随机挑取10个克隆，并对其ESTs进行了测定和初步分析。经BLASTn和FASTA3分析后发现，4个ESTs在鸡中已有同源序列，4个在人或其他物种中也可以找到同源序列，有两个为未知功能基因。所测10个ESTs序列均...
一个小鼠未分化胚胎癌细胞特异cDNA的分子克隆
胚胎癌细胞分子克隆
2008/2/3
摘要用胚胎癌细胞株(EC)PCC3的poly(A)+RNA及质粒pBR322在大肠杆菌中建立了一个cDNA文库。 用另一株EC细胞F9及由EC细胞衍生的分化细胞株滋养层母细胞癌TDM1的32PcDNA作探针，对P CC3 cDNA文库作了差别筛选。自3，000个cDNA克隆中筛出25个克隆。其中1个克隆MS3含有长 250bp的cDNA。用MS3 cDNA作探针，在F9细胞中能检出1个占poly(...
摘要为了合成3p端无pol式A）的病毒RNA（登革热病毒II）的3’区的长的cDNA，我们用RNA连接酶，把30端被PCP封闭了的Poly(A) <50bP连在病毒RNA的3'端，构成一个病毒RNA-posy( A升PC P型模板，可用oligo(dT,。一：：）作引物，再用Watson和Jackson (1985)的RNase H代替硷降解法来合成CDNA。结果获得了）5kb的cDNA。重组克隆...
鲑鱼泌乳素cDNA的分子克隆和序列分析
泌乳素 cDNA DNA硷基序列分析
2008/2/3
摘要从太平洋切奴克鲑鱼的垂体制备cDNA文库。按照鲑鱼泌乳素的部分蛋白质序列所提供的信息 合成寡聚脱氧核苷酸探针。用探针筛查泌乳素基因，识别出一个阳性克隆PRL-10。该克隆的 硷基序列已被测出。PRL-10的总长为1.1kb,编码了含有211个氨基酸组成的泌乳素前体，其 中包括了编码23个氨基酸的信号肽序列和编码188个氨基酸的成熟泌乳素序列。
单克隆抗体γ3重链可变区cDNA 合成与克隆
单克隆抗体 Vγ3重链 cDNA 克隆
2008/2/2
摘要用异硫氰酸胍法从分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA，经oligo（dT）-纤维素柱亲 和层析获得poly(A)+RNA后，用恒定区5' 端第122-125号氨基酸密码的互补序列3' A-T-A-G- G-T-G-A-C-C 5' 做为引物，进行逆转录酶反应，合成双链cDNA，大小为300bp左右，与重链 可变区基因的长度相符。用dC:dG接尾的方法，将ds-cDNA插入pUC19质粒，转...
野生大豆未成熟种子总mRNA的分离及其cDNA的分子克隆
野生大豆 mRNA cDNA 克隆
2008/2/2
摘要用氯化锂沉淀法从野生大豆(G.sojα)未成熟种子中制备总RNA，经oligo(dT)-纤维素柱亲和 层析，获得总mRNA，在兔网织红细胞体系中表现出一定翻译活性。以总mRNA为模板，oligo( dT)12 18 为引物，反转录酶催化合成第一链cDNA，RNaseH-DNA聚合酶Ι协同合成第二链cDN A。双链cDNA的长度大约为200-5000bp，且不存在发夹结构。将双链cDNA修补后钝...
hTERT cDNA片段的克隆及其单克隆抗体与喉癌的发病机制
端粒酶 单克隆抗体 喉癌 免疫组化
2008/2/1
摘要端粒酶的激活及其调控机制至今仍不清楚。为研究喉癌发生中端粒酶表达规律及激活的可能机制，我们克隆了hTERT cDNA片段并制备了抗hTERT单克隆抗体。应用此抗体对喉癌组织进行了免疫组化检测，发现喉癌分化程度降低与癌组织中hTERT阳性细胞率增高有关；而C-Myc表达与hTERT表达呈明显正相关，提示C-Myc可能对喉癌发生过程中端粒酶的激活起着重要作用。这些研究表明，喉癌的发生可能是由于C-...
一个陆地棉羧基末端蛋白酶cDNA的克隆及其表达分析
陆地棉 羧基末端蛋白酶 表达特性
2008/1/30
摘要利用PCR筛选方法从陆地棉纤维cDNA文库中分离出1个基因序列，命名为GhCtp。该cDNA全长1 917 bp，编码1个含473个氨基酸残基的多肽。GhCtp蛋白与拟南芥和水稻中的一类羧基末端蛋白酶具有较高的同源性，在GhCtp的N-末端有1个精氨酸富集区，而C-末端有1个Pfam数据库中编号为DUF239的高度保守区域；该蛋白的N-末端还存在1个在拟南芥和水稻羧基蛋白酶中所缺乏的ATP/G...
水稻葡萄糖-6-磷酸脱氢酶cDNA的电子克隆
水稻 电子克隆 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 RT-PCR
2008/1/29
摘要电子克隆是基因克隆的新策略.以小麦胞质葡萄糖-6-磷酸脱氢酶cDNA (Tagpdl克隆)序列为信息探针,在GenBank水稻nr数据库中找到高度同源的水稻基因组序列,通过人工序列拼接及RT-PCR确认得到了水稻该基因的全长cDNA序列,命名为OsG6PDH.OsG6PDH与小麦Tagpdl克隆的DNA一致率为88%,推导的氨基酸序列与小麦、番茄、烟草的胞质葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因的一致率分...
一个陆地棉bZIP蛋白cDNA的克隆及表达分析
陆地棉 bZIP蛋白 表达特性
2008/1/29
摘要利用PCR筛选方法从陆地棉纤维cDNA文库中筛选到一个全长cDNA序列，命名为GhbZIP。其编码产物长度为645 个氨基酸残基，序列中含有两个未知功能的保守区域DUF630和DUF632，而DUF632区中有一个类似碱性亮氨酸拉链基元；此外氨基酸序列中还存在一个富脯氨酸区和一个富苯丙氨酸区，因此该蛋白具有植物碱性亮氨酸拉链蛋白的结构特征。亲水性分析表明，GhbZIP为一个典型的膜蛋白。Ghb...
摘要报道了人肝脏中一种新的NRDR剪接体（NRDR short isoform, NRDRiso）cDNA的发现与克隆。在用RT-PCR法局部扩增人与小鼠肝脏635 bp的NRDR DNA时，在人肝中发现了另一短序列PCR产物，克隆后测序显示其整个序列与NRDR cDNA编码区的前后序列完全一致。采用3′-Race和5′-Race方法，从人肝组织细胞中扩增得到两个全长cDNA，除1261 bp的N...
小麦盐胁迫应答cDNA的分离克隆及其特异片段SR07转烟草抗逆性分析
小麦 盐胁迫应答cDNA 烟草 抗逆性
2008/1/24
摘要0.05），而PEG和甘露醇抗性与对照株相比有显著性差异（P<0.05），推测SR07表达蛋白可能在植物水分调节方面有重要作用。
番茄GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶cDNA的克隆、表达及定位
番茄 GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶 分子克隆 基因表达 定位
2008/1/23
GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶催化GDP-D-甘露糖的合成，是植物抗坏血酸生物合成途径中上游的关键酶。以马铃薯GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶cDNA序列为信息探针，在GenBank dbEST数据库中找到65条高度同源的番茄EST序列，通过序列拼接及RACE-PCR得到了番茄该基因的全长cDNA序列，命名为LeGMP。LeGMP 与马铃薯GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶cDNA序列一致率为96%，推导的氨...
家蚕（B. mori）后部丝腺体丝心蛋白 mRNA及其基因克隆，前人已有报道[6,9,11,13]. 本文介绍我们以蓖麻蚕(Attacus ricini）后部丝腺体为材料分离出Poly(A)+RNA，通过反转录途径将mRNA-cDNA杂双链与质粒pBR 322重组，转化大肠杆菌C600，从转化菌中筛选出一株含有插人了外源cDNA片段的重组克隆，并对它进行了初步鉴定。