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【目的】研究重组杆状病毒BV-T7杂合表达体系能否有效转导禽类细胞并在禽类细胞中表达外源基因(eGFP)，从而构建能在禽类细胞中高效稳定表达外源基因的重组杆状病毒表达系统。【方法】本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，结合T7 表达系统，通过对eGFP 表达水平的调控来把握噬菌体T7 RNA聚合酶(T7 RNAP)的功能。利用两支重组杆状病毒，pFastBac-CMV-T7 RNAP 重...
大鼠谷氨酰胺转运蛋白SNAT2-EGFP融合蛋白的表达与鉴定
谷氨酰胺转运蛋白 增强型绿色荧光蛋白 融合蛋白 表达
2012/7/20
谷氨酰胺转运蛋白是中枢神经系统中一种重要的中性氨基酸转运蛋白， 对谷氨酰胺的跨膜转运十分重要。为了更方便地研究大鼠谷氨酰胺转运蛋白2 (SNAT2)在细胞膜上的表达与定位， 利用亚克隆技术将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)构建于SNAT2的C端， 通过菌液PCR、酶切和DNA测序鉴定重组真核表达质粒; 将测序正确的重组质粒瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293T cells)，用Western blot...
【目的】获得转EGFP基因神经干细胞并监测其自我更新、增殖和多向分化潜能;通过用EGFP对神经干细胞进行标记和体外追踪实验,为EGFP作为示踪标记对神经干细胞进行体内移植研究奠定基础。【方法】利用神经干细胞培养技术体系,从胎龄30 d猪胎儿脑组织中分离培养神经干细胞,通过脂质体介导转染技术,将EGFP基因导入神经干细胞,诱导转基因神经干细胞贴壁分化,观察其体外增殖、分化特点。采用RT-PCR技术检...
EGFP小鼠ES细胞来源的生殖系嵌合小鼠的获得和鉴定
EGFP转基因小鼠 嵌合体 杂种ES细胞 生殖系
2009/6/25
生殖系嵌合体的获得是实现ES细胞介导的转基因途径的决定步骤，而嵌合体的制作及生殖系嵌合体的获得则是判定ES细胞系是否具有配子分化能力的有效方法。利用一株表达绿色荧光蛋白的杂种ES细胞系制备出嵌合体小鼠，共获得9只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠，其中有8只雄性，1只雌性，目前均发育成健康成年小鼠。流式细胞检测显示了绿色荧光蛋白在嵌合鼠以下器官的表达情况：心(77.96±15.78)%、脾(84.06±...
通过重叠区扩增基因拼接法(Gene splicing by overlap extension，SOEing)构建含有杜氏盐藻(DunalieUa salina)硝
酸盐还原酶(NR)基因5 一上游序列(Pnr)and 3'-端序列(Tnr)的EGFP真核表达载体，并将其转化杜氏盐藻。利用改
进的SOEing法，将杜氏盐藻NR基因Pnr与报告基因EGFP cDNA融合，并与pEGM一7 克隆载...
外源报告基因EGFP在盐藻中实现瞬时表达
微藻 杜氏盐藻 遗传转化 CaMV35S 加强型绿色荧光蛋白报告基因
2007/12/24
摘要 探索杜氏盐藻 (Dunaliellasalina)的转基因方法和筛选方法 .利用烟草花叶病毒启动子 (CaMV35S)、衣藻叶绿体atpA启动子与来源于水母的加强型绿色荧光蛋白报告基因 (EGFP)构建表达载体pART7GFP和pUCGFP ,转化盐藻 .EGFP在CaMV 35S启动下表达出绿色荧光蛋白 ,在荧光显微镜下看到发绿色荧光的转基因盐藻 .根据荧光数目进行统计 ,转化效率高于 5...
摘要 为减轻逆转录病毒介导的外源基因的沉默 ,进一步提高逆转录病毒MFG载体介导的转移基因的表达 ,将人 β INF基因上游 80 0bp的核骨架基质结合区 (S MAR)分别反向和正向克隆至MFG载体 3′LTR上游 ,以egfp为报告基因观察S MAR对egfp基因表达水平以及对病毒滴度的影响 .结果显示 :反向和正向的S MAR在瞬时表达的情况都不能提高egfp的表达 ,但在稳定整合的情况下...
携EGFP基因的逆转录病毒包装细胞的分选和滴度测定
2007/7/25
逆转录病毒载体是基因治疗中最常用的病毒载体, 它具有将目的基因高效转染细胞, 并稳定表达的优点[1]。目前逆转录病毒载体通常采用新霉素磷酸转移酶基因作为筛选标记, 筛选并得到有效的包装细胞克隆需要4~6周，这种方法具有周期长、繁琐等缺点[2]，寻找新的有效快捷的获得包装细胞的方法是简化逆转录病毒载体应用的基础。绿色荧光蛋白(green fluorescence protein，GFP)是一种能发出...
Truncated forms of viral VP2 proteins fused to EGFP assemble into fluorescent parvovirus-like particles
VP2 proteins fluorescent parvovirus
2006/12/22
8 December 2006，Fluorescence correlation spectroscopy (FCS) monitors random movements of fluorescent molecules in solution, giving information about the number and the size of for example nano-particl...