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探讨caspase募集结构域家族成员18（CARD18)在凋亡素诱导胃癌细胞凋亡的机制及在胃癌发生发展中的作用。方法 运用二维凝胶电泳法分离凋亡素作用胃癌细胞后表达的差异蛋白质, 通过基质辅助激光解吸附飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-MS)和生物信息学方法确定其中部分差异蛋白质, RT-PCR和Western blot法检测CARD18的表达, 采用免疫组化检测56例胃癌组织及癌旁组织中CA...
hHCN2基因转染的脂肪组织来源的成体干细胞可分化为起搏样细胞
hHCN2基因转染 脂肪组织来源 体干细胞 起搏样细胞
2013/9/16
大鼠脂肪来源的成体干细胞（ADSC）转染人超极化激活环核苷酸门控离子通道-2（hHCN2）基因, 观察其作为起搏细胞的可行性。方法 取生长良好的ADSC转染hHCN2基因, 通过RT-PCR、Western blot分析、免疫荧光技术检测hHCN2基因及蛋白的表达, 用膜片钳技术检测细胞的电生理特征并记录其内向电流。将转染hHCN2基因的ADSC与心室肌细胞共培养, 观察其对心室肌细胞自发性搏动的...
研究减数分裂重组蛋白11(MRE11)基因沉默对5-氟尿嘧啶（5-FU）耐药的肝癌细胞株Bel7402/5-FU的化疗敏感性及耐药相关蛋白1(MRP1)表达的影响, 探讨MRE11与肝癌耐药性的关系。方法 采用阳离子脂质体法将shMRE11干扰质粒转染BEL7402/5-FU细胞, 实时定量PCR（qRT-PCR）及Western blot法检测沉默效率; MTT法检测转染后BEL7402/5-F...
鉴定人脐带间充质干细胞（hUCMSC）, 通过体外修饰增加体外合成mRNA转染hUCMSC的稳定性。方法 流式细胞仪检测hUCMSC免疫表型, 油红O和碱性磷酸酶染色分别进行成脂、成骨分化鉴定。体外合成EGFP的mRNA经polyA尾、帽子结构及碱基等方面的修饰转染hUCMSC, 流式检测荧光强度。Trypan blue染色观察mRNA转染对细胞活性的影响。结果 hUCMSC高表达CD29、CD4...
克隆TRAF3IP3基因，明确TRAF3IP3在部分人类组织中的表达谱并鉴定其表达产物的亚细胞定位。 方法 采用实时定量PCR检测TRAF3IP3基因在人体各组织中的表达情况；克隆TRAF3IP3基因开放读码框区（ORF）并构建真核亚细胞定位质粒。转染人胚肾HEK 293细胞，激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的亚细胞定位。 结果 实时定量PCR证实TRAF3IP...
构建C型凝集素受体(C-type lectin receptor，CLRs)过表达/siRNA慢病毒载体，并将其瞬时转染树突状细胞(dendritic cell，DC)。方法 免疫磁珠分离、培养及鉴定胎盘和蜕膜来源的DC;构建CLRs过表达/siRNA慢病毒载体并转染DC;抽提转染CLRs过表达/siRNA慢病毒后的DC的总RNA;RT-PCR检测DC转染慢病毒前后CLRs基因mRNA表达量。结果...
观察人脐血源基质细胞(hUCBDSCs)经腺病毒介导的缝隙连接蛋白43(Cx43)转染后Cx43基因表达的变化以及转染前后分别对CD4+T分泌IL-4、CD8+T分泌IFN-γ的影响。方法 用重组腺病毒Ad-Cx43-GFP转染hUCBDSCs，荧光显微镜报告基因GFP的表达并计算转染效率，RT-PCR法、Western blot法、免疫荧光法检测hUCBDSCs转染前后Cx43基因及蛋白表达情况...
探讨转染Cx43(Connexin 43)人脐血源基质细胞(hUCBDCs)对人急性淋巴细胞白血病细胞SUP-B15增殖的影响。方法 重组腺病毒转染以上调人脐血源基质细胞Cx43表达，建立人脐血源基质细胞和SUP-B15细胞共培养模型，选取共培养72 h为时间点收集悬浮SUP-B15细胞，采用CCK-8检测SUP-B15细胞的增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果 人脐血源基质细胞抑制SUP...
GFP-LC3真核表达载体构建、定位及胶质瘤U87稳定转染细胞系筛选
绿色荧光蛋白质类 自噬 神经胶质瘤 LC3
2014/2/24
构建GFP-LC3真核表达载体，验证其在胶质瘤U87细胞系中对细胞自噬现象的指示作用，并获得稳定转染该载体的U87细胞。方法 以人外周血cDNA为模板扩增全长LC3基因，通过分子生物学操作将其导入pcDNA3-GFP中，得到重组质粒pcDNA3-GFP-LC3。将重组及对照质粒转染胶质瘤U87细胞系，雷帕霉素(Rapamycin)处理48 h后用Western blot方法检测细胞中自噬相关蛋白表...
氟砷联合染毒对大鼠神经元超微结构影响
海马 大脑皮质神经元 突触 超微结构
2014/5/27
探讨氟、砷及联合染毒对大鼠海马、大脑皮质神经元及神经突触超微结构影响。方法 初断乳SPF级SD大鼠随机分为4组，氟、砷处理组大鼠分别自由饮用120 mg/L氟化钠（NaF）和70 mg/L亚砷酸钠（NaAsO2）水溶液，氟砷联合染毒组饮用120 mg/L NaF+70 mg/L NaAsO2混合水溶液，对照组饮用蒸馏水；各组大鼠染毒3个月，用透射电子显微镜观察各组大鼠海马、大脑皮质神经元和突触超微...
探讨乙型肝炎病毒x基因（hepatitis B virus x，HBx）转染人近端肾小管上皮细胞系（HK-2）后其对T 细胞激活、分化的影响。 方法 分4 组：实验组（即转染HBx 质粒的HK-2细胞+CD4+ T 细胞）、阴性对照组（即转染HBx 空载质粒的HK-2 细胞+CD4+ T 细胞）、单独培养组（即CD4+ T细胞）和空白对照组（未处理HK-2细胞+CD4+ T细胞）。体外培养...
探讨出生前后镧暴露对子代大鼠海马环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（CREB）磷酸化水平、脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA及蛋白表达影响。方法 60只Wistar雌性大鼠随机分为对照组和低、中、高剂量镧染毒组，各镧染毒组从雌鼠受孕日起到子鼠断乳后1个月通过自由饮水方式染毒，测定海马p-CREB、BDNF mRNA和蛋白表达水平。结果 与对照组比较，低、中、高剂量染镧组子代大鼠海马p-CREB蛋白表达...
染铅大鼠铁过载致神经元损伤特殊染色法分析
铅暴露 铁过载 神经元损伤 图像融合
2014/5/27
探讨长期铅暴露大鼠铁过载对神经元的损伤。方法 SD大鼠母代与子代分别设对照、低、高剂量铅暴露组（母代：800、1 500 mg/L，子代：300、900 mg/L 乙酸铅饮水方式染毒）连续70周；电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-AES）测血液和海马元素铅及铁，同部位海马石蜡切片分别行铁染色及硫堇染色并进行图片融合。结果 染铅后，大鼠血和海马铅及海马铁含量均增加（P<0.01）；低、高剂量铅暴露...
探讨低剂量甲醛长期染毒对永生化人支气管上皮细胞16HBE癌症相关基因启动子区甲基化水平的影响。方法 16HBE细胞每周染毒甲醛10 μmol·L-1 24 h,连续24周,分别于染毒3, 6, 9, 12, 15, 18, 21和24周提取RNA或DNA,应用DNA甲基化相关酶消化结合荧光定量PCR的方法观察24个癌症相关基因启动子区甲基化水平的变化;应用荧光定量PCR的方法观察染毒对亚甲基四氢叶...
观察转染微小 RNA-146a（ miR-146a） 对大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子肿瘤坏死因子 -琢（ TNF-琢）表达的影响，探讨转染 miR-146a 对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用。 方法 体外培养大鼠肺泡巨噬细胞株 NR8383，分别以 25、50、100?nmol/L?Cy TM 3 标记的 Pre-miR TM 阴性对照转染细胞，选择转染效率最高的浓度作为实验浓度。 将 NR8383 ...